IBIAN Technologies le ofrece un nuevo sistema para la detección rápida de micoplasmas en cultivos celulares: MycoStrip™
MycoStrip™ es una prueba simple que no requiere equipos especiales y proporciona resultados claros, sin falsos positivos. Además, con resultados en menos de una hora.
MycoStrip™ ha sido desarrollado por la casa InvivoGen con más de 40 años de experiencia en el desarrollo de soluciones frente a micoplasmas para el cultivo celular.
Principio del ensayo
La detección de micoplasmas en cultivos celulares mediante MycoStrip™ se basa en la PCR isotérmica. Simplemente prepare su muestra y agregue nuestra mezcla de reacción patentada para detectar y amplificar el gen de ARNr 16S para las especies de micoplasmas más comúnmente encontradas en cultivos celulares. Los resultados se visualizan claramente en una tira inmunocromatográfica en 5 minutos.
Aspectos clave de MycoStrip™
➔ Simple
Fácil de realizar y, a diferencia de la mayoría de los otros ensayos de detección de micoplasmas, no se requiere equipo de laboratorio especial.
➔ Rápido
Se realiza en 1 hora, con menos de 15 minutos de tiempo práctico.
➔ Claro
Resultados rápidos y fáciles de interpretar que aparecen en 2-5 minutos, como 1 o 2 bandas en la tira.
- Una banda – negativa para micoplasma
- Dos bandas: positivas para micoplasma
➔ Específico
MycoStrip™ ha sido diseñado específicamente para detectar las especies de Mycoplasma y Acholeplasma que más comúnmente contaminan los cultivos celulares. Estos incluyen las seis especies que representan el 95% de todas las contaminaciones: M. orale, M. hyorhinis, M. arginini, M. fermentans, M. hominis y A. laylawii. Es importante destacar que debido a que la mezcla de reacción MycoStrip™ detecta regiones únicas de ADN, no hay reactividad cruzada con otro ADN de bacterias, hongos o mamíferos.
➔ Sensible
MycoStrip™ es capaz de detectar tan solo 10 – 102 CFU/ml y, por lo tanto, puede usarse para detectar la contaminación por micoplasma antes de que afecte significativamente los resultados experimentales, lo que generalmente ocurre a ~ 107 CFU / ml [1].
Referencias:
- Drexler, H.G. & Uphoff, C.C. 2002. Mycoplasma contamination of cell cultures: Incidence, sources, effects, detection, elimination, prevention. Cytotechnology 39, 75-90.
Una banda (solo banda «C») indica que no se detectó micoplasma en la muestra procesada. Dos bandas (banda «C» y «T») indican que la muestra procesada está contaminada por micoplasma. La banda de control de migración («C») aparecerá en 1-2 minutos. Si después de 5 minutos no hay una banda de prueba («T»), la prueba se considera negativa.
Contenido del kit MycoStrip ™
| Contenido | 10 pruebas | 20 pruebas | 50 pruebas |
| •Reaction Mix •Tampón de Reacción •Migración Buffer •Control Positivo •tiras de detección | 1 vial 1 vial 2 viales 1 vial 10 | 2 viales 2 viales 3 viales 1 vial 20 | 5 viales 4 viales 1 botella 1 vial 50 |
| Precios | Ver precio | Ver precio | Ver precio |
- MycoStrip™ se envía a temperatura ambiente.
- Almacene todos los componentes (incluidas las tiras de detección) a -20 ° C.
- Si se almacena correctamente, todos los componentes son estables durante 12 meses.
Detalles
Contaminación por micoplasmas
Los micoplasmas son un problema importante en el cultivo celular, con diversas fuentes de contaminación como: operadores de laboratorio, incubadoras/baños de agua y muestras biológicas. Debido a su pequeño tamaño, los micoplasmas son indetectables por inspección visual, pasan por filtración estándar y son resistentes a una gran cantidad de antibióticos. Hay muchas razones para analizar regularmente los cultivos celulares para detectar micoplasmas y estas incluyen:
- Pérdida de muestras valiosas.
- Grave impacto en la confiabilidad y reproducibilidad de los datos
- La mayoría de las revistas exigen pruebas para su publicación.
- Pérdida de tiempo y dinero.
Preguntas frecuentes
1. ¿Qué pasa si tengo una contaminación de micoplasma?
Su cultivo se puede tratar fácilmente con nuestros reactivos completos anti-micoplasma. Simplemente trate su cultivo con Plasmocin™ o Plasmocure™ y una vez finalizado el tratamiento (~ 2 semanas), vuelva a realizar la prueba con MycoStrip™.
2. He recogido algunas células con el sobrenadante que se va a analizar, ¿interferirá esto con el ensayo?
No hay necesidad de preocuparse, la presencia de ADN de células de mamíferos no afectará al ensayo de detección.
3. Durante la preparación de la muestra, ¿hay alguna ventaja en calentar la muestra a 95 ºC?
No hay aumento en la sensibilidad, sin embargo, este paso matará el micoplasma evitando la manipulación de micoplasmas vivos.
4. ¿Es necesario incluir un control positivo y negativo cada vez que se usa MycoStrip™?
Es importante incluir controles positivos y negativos de manera regular para monitorear la fiabilidad de sus resultados y en caso de problemas.
5. ¿En qué etapa puedo congelar mi muestra para un análisis posterior?
Las muestras se pueden almacenar de la siguiente manera:
- Sobrenadante de cultivo celular: antes de iniciar el protocolo de “preparación de muestras”, puede almacenar el sobrenadante a -20 °C hasta que sea necesario. Antes de usar, descongele completamente la muestra a 37 °C y mezcle bien agitando para asegurarse de que todas las sales se disuelvan.
- Muestra preparada: Después de realizar los pasos 1 – 4 del protocolo de “preparación de muestras”, su muestra puede almacenarse a -20 °C hasta que se necesite.
- Muestra procesada: después de realizar los pasos 1 a 4 del protocolo de «ensayo de detección», las muestras procesadas se pueden almacenar a -20 °C durante un máximo de 3 meses.
6. Tengo una banda de prueba tenue para una de mis muestras y no estoy seguro de si debe considerarse positiva para la contaminación por micoplasma. ¿Qué recomendarías?
Si observa una banda tenue en una de sus muestras, consideramos que este es un resultado positivo para la contaminación por micoplasma. Recomendamos confirmar este resultado con uno de los siguientes pasos:
- Concentre su muestra: comience con un volumen mayor de sobrenadante y/o repita los pasos 2-3 en el protocolo de “preparación de muestras”. Vuelva a analizar la muestra concentrada con MycoStrip™.
- Continúe cultivando el cultivo durante 48 horas adicionales antes de volver a realizar la prueba con MycoStrip ™.
- Use agua esterilizada (sin nucleasas) para resuspender la muestra en lugar de PBS (para aumentar la sensibilidad de la prueba).
7. No tengo un bloque térmico en el laboratorio, ¿qué recomendaría usar en su lugar?
Si no tiene un bloque térmico, puede usar un termociclador o un baño de agua en su lugar. Tenga en cuenta que el uso de un baño de agua puede introducir nuevas fuentes de contaminación.
8. He dejado mi muestra preparada durante más de una hora en el bloque térmico y me pregunto si todavía puedo usar esta muestra.
Exceder la incubación de 40 minutos a 65 ºC afecta significativamente los resultados del ensayo y, por lo tanto, no recomendamos utilizar esta muestra.
Ver también Control de Micoplasmas
También puede necesitar
Plasmocure™ : Reactivo alternativo para la eliminación de micoplasmas
Plasmocin™ : Reactivo de eliminación de micoplasmas
