Una forma para estudiar sin riesgo la eficacia de las vacunas y los tratamientos con anticuerpos contra las variantes emergentes del SARS-CoV-2 es utilizar el ensayo de fusión celular que presentamos en este artículo.
El número creciente de variantes del SARS-CoV-2 se caracteriza por varias mutaciones dentro de la proteína antigénica de la Spike. Estas mutaciones proporcionan una ventaja selectiva al virus, ya que se ha demostrado que ayudan el virus a escapar del sistema inmunológico humano. Lo que en última instancia hace que la vacuna y las estrategias terapéuticas sean menos efectivas. Por lo tanto, es imperativo desarrollar enfoques novedosos para inhibir la entrada del SARS-CoV-2 en las células diana. El ensayo de fusión celular de la casa InvivoGen ha sido diseñado específicamente para permitir estudiar la eficacia de la vacuna y los tratamientos con anticuerpos contra las variantes emergentes y detectar inhibidores de la fusión celular dependiente de la spike del SARS-CoV-2.
El sistema es un ensayo sencillo para estudiar la fusión celular dependiente de Spike-ACE2. En concreto se basa en la transferencia de la molécula adaptadora, MyD88, de una «línea celular donante» a una «línea celular aceptora» que expresa un gen indicador inducible por NF-kB-SEAP. La fusión celular se puede cuantificar fácilmente en el sobrenadante del co-cultivo utilizando el reactivo de detección SEAP, QUANTI-Blue Solution ™.
Fusión celular en tres sencillos pasos
1) Generación de células «donantes» 293-hMyD88-Spike
Las células «donantes» 293-hMyD88-Spike se han generado después de la transfección estable de la línea celular 293-hMyD88 con un plásmido de expresión optimizado que presenta una de las variantes de Spike (por ejemplo, UK B.1.1.7, Sudáfrica B.1.351, etc. ).
2) Co-cultivo de células «donantes» con células «aceptoras» hACE2-TMPRSS2
InvivoGen ha diseñado células “informadoras” derivadas de HEK293 y A549, HEK-Blue ™ y A549-Dual ™ , para expresar de manera estable los receptores de SARS-CoV-2, ACE2 y TMPRSS2, haciéndolos “permisivos” a la infección. Tras el co-cultivo de las dos células las células «donantes» 293-hMyD88-Spike con las células «aceptoras» el Spike se unirá a ACE2 y será escindida proteolíticamente por TMPRSS2. Estos eventos conducirán a la fusión celular.
3) Evaluación de la liberación de SEAP mediada por fusión
Las «células aceptoras» de InvivoGen se han diseñado para expresar la SEAP dependiente de NF-kB. Por tanto, tras la fusión celular, el MyD88 sobreexpresado en la célula «donante» activará una cascada de señalización en la célula «aceptora» que conduce a la producción de SEAP dependiente de NF-кB.
SEAP se cuantifica fácilmente en el sobrenadante de co-cultivo utilizando el reactivo de detección SEAP, Solución QUANTI ‑ Blue ™ .
Este sistema permite estudiar la eficacia de los tratamientos y las vacuna frente al SARS-CoV-2 sin tener que utilizar la partícula viral.
Las posibles aplicaciones son:
- Estudio de las vías de detección del ARN del SARS-CoV-2
- Detección de inhibidores de moléculas pequeñas y / o anticuerpos neutralizantes de la interacción ACE2-Spike
- Detección de inhibidores de moléculas pequeñas y / o anticuerpos neutralizantes de la proteasa de superficie TMPRSS2
- Estudios comparativos de los efectos de los fármacos dirigidos a ACE2 y / o TMPRSS2 sobre la infección por SARS-CoV-2 y los resultados de la señalización celular
