A la hora de expresar, detectar o inmovilizar proteínas recombinantes se requiere una gran artillería de herramientas que van desde distintos sistemas de expresión, promotores o marcadores fluorescentes. Debido a la gran diversidad que existe en relación a la naturaleza de las distintas proteínas, resulta casi imposible poder predecir qué combinación de herramientas es la idónea. Para intentar resolver este problema y hacerlo algo más sistemático se ha desarrollado StarGate Cloning System. Se trata de un sistema eficiente y rápido para clonar proteínas recombinantes funcionales, así como complejos proteicos. Inicialmente, el gen en cuestión es clonado en un Vector Donor para seguidamente ser transferido a distintos Vectores Aceptores y generar así Vectores Destino. Este último vector lo que permite es la eficiente expresión de nuestra proteína con distintas características en diferentes hospedadores.
El Vector Entry se suministra abierto y desfosforilado previniendo así su recircularización. Esto hace que sea necesario fosforilar el gen que se desea clonar y además se debe flanquear por una combinación de 4 pb, consiguiéndose gracias a una PCR.
El elemento central de esta nueva tecnología es la enzima combinatoria sitio-específico: StarCombinaseTM, la cual realiza clonaciones versátiles, rápidas, fáciles y seguras.
El usar este sistema de clonación lleva implícito una serie de ventajas como son:
- Procedimiento sencillo con el requerimiento de un solo tubo (una hora).
- Mínima modificación del gen a clonar (sólo 4pb).
- Screening sistemático de distintos elementos (promotores, marcadores) para poder ser usado en una gran variedad de hospedadores.
- Clonación eficiente gracias a una reacción directa.
- Disponibilidad de una gran multitud de sitios para la clonación.
- Fácil generación de proteínas de fusión.
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