Qué es ProbeMaster® Lyo dsGreen:
ProbeMaster® Lyo dsGreen es una master mix liofilizada que incorpora todos los componentes necesarios para la reacción de PCR, junto con el colorante intercalante dsGreen para la detección fluorescente en qPCR. Su formulación está optimizada para proporcionar una amplificación eficiente y específica, y se reconstituye directamente mediante la adición del volumen indicado de agua.
La master mix liofilizada incluye:
HS (Hot Start) Taq DNA Polymerase
Mezcla equilibrada de dNTPs
Tampón de PCR con Mg²⁺
dsGreen
Crioprotectores, esenciales para preservar la actividad enzimática en formato liofilizado
Hot Start mediante anticuerpos para el control de la inespecificidad
La mezcla utiliza una Taq DNA polimerasa Hot Start (HS Taq) basada en un complejo enzima–anticuerpo monoclonal. Durante la fase inicial de desnaturalización, el calentamiento inactiva los anticuerpos y libera la actividad de la polimerasa, lo que contribuye a reducir la amplificación inespecífica y la formación de dímeros de cebadores.
Este aspecto resulta especialmente relevante en qPCR con colorantes intercalantes, donde cualquier fragmento de ADN de doble cadena contribuye a la señal fluorescente.
La HS Taq indicada presenta actividades 5′→3′ polimerasa, 5′→3′ exonucleasa y adeniltransferasa.
Preparación: menos pasos y menor variabilidad
El formato 5× liofilizado está diseñado para simplificar la preparación de las reacciones. Tras la reconstitución con 450 µL de agua, un único tubo es suficiente para 100 reacciones de 25 µL.
En la práctica diaria, esto se traduce en:
- Reducción del número de pipeteos
- Menor manipulación de reactivos sensibles
- Preparación más rápida y reproducible
Para preparar la reacción, basta con añadir el ADN diana, los cebadores y agua a la mezcla reconstituida.
Aplicaciones en el laboratorio sin cambiar de química
ProbeMaster® Lyo dsGreen está diseñado para su uso tanto en:
- qPCR (PCR en tiempo real) mediante detección fluorescente del dsGreen
- PCR convencional, con análisis posterior por electroforesis en gel
Esto permite utilizar una misma base de reactivos al alternar entre cuantificación y verificación del producto amplificado, manteniendo coherencia experimental.
Esta master mix, es adecuado:
en aplicaciones que no requieren alta fidelidad. Como molde pueden emplearse ADN genómico, viral, plasmídico, entre otros tipos de ADN
Entre las aplicaciones indicadas se incluyen:
PCR en tiempo real
PCR con detección por electroforesis
PCR sobre ADNc generado por retrotranscripción
Genotipado
Colony PCR
Generación de productos para clonación TA
Un aspecto clave: ausencia de UDG/dUTP
La mezcla no contiene UDG ni dUTP, un detalle relevante cuando se requiere el uso posterior del amplicón, por ejemplo en clonación rutinaria u otras aplicaciones en las que el producto de PCR actúa como material de partida
Estabilidad, almacenamiento:
Desde el punto de vista operativo y logístico, se especifica:
Almacenamiento
Hasta 12 meses a 4 °C desde la entrega
Transporte
Hasta 21 días a temperaturas de hasta 25 °C
Tras la reconstitución:
- Hasta 30 días a 4 °C
- Almacenamiento a −20 °C dentro de la fecha de caducidad
- Tolerancia a hasta cinco ciclos de congelación/descongelación
La mezcla es soluble en agua y el control de calidad se realiza mediante un ensayo funcional.
En cuanto a instrumentación, se declara compatibilidad con todo tipo de termocicladores, lo que facilita su integración en plataformas ya existentes.
¿Para qué tipo de laboratorio resulta especialmente adecuada?
ProbeMaster® Lyo dsGreen es especialmente útil en flujos de trabajo que requieren:
qPCR con detección por ADN de doble cadena (sin sondas)
PCR convencional con análisis en gel
Preparación de amplicones para clonación TA
El enfoque “todo en uno” en formato liofilizado contribuye a estandarizar la preparación de reacciones y a reducir la probabilidad de errores ecialmente útil en flujos de trabajo que requieren: