Los lipopolisacáridos (LPS), también conocidos como endotoxinas, son el mayor componente de la pared celular de las bacterias Gram-negativas. Son potentes estimuladores del sistema inmunitario innato de los vertebrados causando fiebre, shock séptico y en algunos casos muerte. Por esta razón, resulta crucial monitorizar la presencia de LPS en los compuestos biológicos, incluidos los adyuvantes vacunales y los inhibidores del test LAL.
El HEK-Blue LPS detection kit 2 (rep-lps2) es un nuevo ensayo colorimétrico basado en una línea celular, para la detección de Endotoxinas biológicamente activas. Es un ensayo simple, rápido y fiable para detectar la presencia de endotoxina en prácticamente todas las muestras biológicas, por esto ofrece una sustancial alternativa al test LAL.
El nuevo HEK-Blue LPS detection kit 2 está basado en la activación del receptor de tipo Toll (TLR4 – sensor de endotoxinas en mamíferos -). Esta familia de receptores reconoce estructuralmente diferentes LPS procedentes de bacterias Gram-negativas.
El kit consiste en una línea celular HEK-Blue PLS, ingenierizada que expresa el gen de tipo toll 4 (TLR4) humano y que permite así, la detección de concentraciones mínimas de endotoxinas (a partir de 0,01 EU/ml).
En presencia de LPS, el TLR4 inicia una cascada deseñalización que conduce a la activación de NF-kB, que en la línea ingenierizada HEK-Blue LPS induce la secreción de SEAP (Secreted embryonic alkaline phosphatase).
La presencia de SEAP en el medio de cultivo se detecta fácilmente gracias al substrato QUANTI-Blue que evidencia una coloración púrpura / azul, que se aprecia fácilmente a simple vista, o se puede medir con un lector de placas a 620-655 nm. Como la absorbancia es directamente proporcional a la cantidad de endotoxinas presentes, la concentración de endotoxinas se calcula con una curva estándar que se obtiene de la dilución serial del estándar HEK-Bluie Endotoxin Standard incluido en el kit (una preparación de E. coli 055:B5 LPS normalizada frente a un control estándar de endotoxina (CSE) aprobados por la FDA).
El kit HEK-Blue LPS detection kit 2 se suministra con los siguientes reactivos:
– 1 vial de HEK-BlueTM-4 cells (línea celular) con una concentración de 3-7·106 células.
– 4 tubos de 250X HEK-BlueTM Selection de 2 ml cada uno.
– 4 tubos de 500X NormocinTM de 1 ml cada uno
– 1 sobre de QUANTI-BlueTM de 100ml.
– 2 tubos de HEK-BlueTM Endotoxin STANDARD (50 EU cada uno).
– 1 tubo de (50 ml) de agua libre de endotoxina.
Los reactivos se pueden pedir por separado una vez comprado el kit con la línea celular.
Las características principales del kit son:
a) Simple: requiere conocimientos básicos de cultivo celular.
b) Versátil: mide niveles de endotoxinas en prácticamente todas las muestras biológicas.
c) Altamente sensible: detecta cantidades a partir de 0,01 EU/ml.
d) Económico: se pueden testar más de 500 muestras, y los reactivos se pueden pedir por separado una vez comprado el kit o la línea celular.
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