El kit 710-CRA para Cariotipo Alta Resolución es la combinación del medio para cultivo de sangre periférica Panserin 701 (de la casa Pan-Biotech) y el reactivo CRA (de la casa Genial Genetics) que aumenta la resolución y mejora la estructura cromosómica para cariotipo de alta resolución.
El kit se compone de: 5 UNIDADES de Panserin 701 (100 mL) y 1 UNIDAD de CRA Chromosome Resolution Additive de 1 ml
Panserin 701 es un producto Ready to Use para el cultivo de linfocitos en sangre periférica, por su características no deberá ser suplementado con ningún reactivo adicional. Contiene también el mitógeno Fitohemaglutinina (PHA)
La cantidad de cultivos que se pueden hacer con el kit 710-CRA depende del protocolo del usuario final, a partir de 100 ml x 5 botellas (500 ml totales) se pueden, por ejemplo, realizar 100 cultivos si se utilizan 5 ml de medio.
El CRA Chromosome Resolution Additive es un reactivo no tóxico, fácil de usar que aumenta la Resolución del cromosoma. CRA, se añade al cultivo 90 minutos antes del sacrificio. La presentación es un vial de 1,0 ml, y se pueden realizar de 100 a 1000 pruebas.
CULTIVO DE SANGRE PERIFÉRICA UTILIZANDO PANSERIN 701
Para el cultivo de linfocitos en sangre periférica se puede usar la sangre directamente o separar los linfocitos mediante la centrifugación en gradiente de densidad. Le presentamos un protocolo general para el cultivo de linfocitos en sangre periférica (1) o con separación de los linfocitos en gradiente de densidad (2). En España, todos los laboratorios que utilizan o han utilizado la PANSERIN 701 no han tenido que cambiar su protocolo ya que el medio de cultivo en todos los casos ha dado igual resultado y en muchos otros casos se han obtenido mejor resultado que con un medio convencional con Suero Fetal Bovino. La ventaja de un medio SerumFree con formulación definida como la Panserin 701 es una prestación constante en el tiempo que no depende del lote de suero utilizado en la preparación de los medios convencionales. También se obtiene mejor resultado en la visualización final de los cromosomas gracias al CRA
Guía rápida: Panserin 701 + CRA
En condiciones de esterilidad añadir 0.5 ml de sangre en un tubo que contenga 5-6 ml de Panserin 701, cerrar y mezclar.
Incubar a 37 ºC durante 48- 72 horas dependiendo de la naturaleza y origen de la sangre.
Preparar la solución de trabajo del CRA disolviendo 0,1 ml del CRA (solución madre) en 9.9ml de agua ultra pura.
Añadir 0,1 ml de solución de trabajo al cultivo
Incubar a 37 ° C durante 30 minutos
Añadir 0,1 ml de Colchicina 10ug/ml durante 10 minutos (Total 40 minutos CRA )
Nota:
- Largas exposición al CRA pueden llevar a una reducción del índice mitótico. Recomendamos que los laboratorios hagan las siguientes pruebas:
- El Chromosome Resolution Additive se puede añadir antes o después de la colchicina.
- Si los laboratorios quieren dejar el CRA durante períodos de tiempo mucho más largos, se debe diluir, entre una cuarta parte y una octava, la concentración del CRA