Nuevo método de detección de endotoxinas mediante TLR 4


Los lipopolisacáridos (LPS), también conocidos como , son el mayor componente de la pared celular de las bacterias Gram-negativas. Son potentes estimuladores del sistema inmunitario innato de los vertebrados causando fiebre, shock séptico y en algunos casos muerte. Por esta razón, resulta crucial monitorizar la presencia de LPS en los compuestos biológicos, incluidos los adyuvantes vacunales y los inhibidores del test LAL.

El HEK-Blue LPS detection kit 2 (rep-lps2) es un nuevo ensayo colorimétrico basado en una línea celular, para la detección de Endotoxinas biológicamente activas. Es un ensayo simple, rápido y fiable para detectar la presencia de endotoxina en prácticamente todas las muestras biológicas, por esto ofrece una sustancial alternativa al test LAL.

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El nuevo HEK-Blue LPS detection kit 2 está basado en la activación del receptor de tipo Toll (TLR4 – sensor de endotoxinas en mamíferos -). Esta familia de receptores reconoce estructuralmente diferentes LPS procedentes de bacterias Gram-negativas.

El kit consiste en una línea celular HEK-Blue PLS, ingenierizada que expresa el gen de tipo toll 4 (TLR4) humano y que permite así, la detección de concentraciones mínimas de endotoxinas (a partir de 0,01 EU/ml).

En presencia de LPS, el TLR4 inicia una cascada deseñalización que conduce a la activación de NF-kB, que en la línea ingenierizada HEK-Blue LPS induce la secreción de SEAP (Secreted embryonic alkaline phosphatase).

La presencia de SEAP en el medio de cultivo se detecta fácilmente gracias al substrato QUANTI-Blue que evidencia una coloración púrpura / azul, que se aprecia fácilmente a simple vista, o se puede medir con un lector de placas a 620-655 nm. Como la absorbancia es directamente proporcional a la cantidad de endotoxinas presentes, la concentración de endotoxinas se calcula con una curva estándar que se obtiene de la dilución serial del estándar HEK-Bluie Endotoxin Standard  incluido en el kit (una preparación de E. coli 055:B5 LPS normalizada frente a un control estándar de endotoxina  (CSE) aprobados por la FDA).

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El kit HEK-Blue LPS detection kit 2 se suministra con los siguientes reactivos:

–        1 vial de HEK-BlueTM-4 cells (línea celular) con una concentración de 3-7·106 células.

–        4 tubos de 250X HEK-BlueTM Selection de 2 ml cada uno.

–        4 tubos de 500X NormocinTM de 1 ml cada uno

–        1 sobre de QUANTI-BlueTM de 100ml.

–        2 tubos de HEK-BlueTM Endotoxin STANDARD (50 EU cada uno).

–        1 tubo de (50 ml) de agua libre de endotoxina.

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Los reactivos se pueden pedir por separado una vez comprado el kit con la línea celular.

Las características principales del kit son:

a) Simple: requiere conocimientos básicos de cultivo celular.

b) Versátil: mide niveles de endotoxinas en prácticamente todas las muestras biológicas.

c) Altamente sensible: detecta cantidades a partir de 0,01 EU/ml.

d) Económico: se pueden testar más de 500 muestras, y los reactivos se pueden pedir por separado una vez comprado el kit o la línea celular.

 

Más artículo de interés:

Proteína STING y sistema inmunitario innato

Presentación del Nuevo kit de detección PlasmoTest (rep-pt1)

 

Nuevos productos:

  New product : HEK-Blue™ TNF-? cells 3-7 x 10e6 cells (hkb-tnfdmyd)

  New product : HEK-Blue™ Endotoxin Standard 10 X 50 EU (rep-hbes-10)

 New product : LPS-EB VacciGrade™ 5 x 10e6 EU (vac-3pelps)

  New product : Normocure™ 50 mg (2 x 1 ml) (ant-noc)

 

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