Un nuevo estándar en el Contaje Automático de Células

El Contador Automático de Células ADAM de NanoEntek (Digital Biotechnology) permite medir el número de células totales y de células viables con tecnología de última generación: en lugar de métodos colorimétricos basados en azul tripán, ADAM detecta fluorescencia, óptica láser y detección con tecnología CCD, lo que hace el proceso de cuantificación mucho más sensible, fiable y reproducible.

El ADAM usa microchips desechables, que eliminan los riesgos inherentes a la exposición a muestras peligrosas (muestras de pacientes, células infectadas con virus, etc.), además de convertir el proceso de cuantificación en algo muy fácil y económico por muestra. La muestras se inyecta por capilaridad con ayuda de una pipeta automática convencional.

El equipo, de diseño ergonómico y compacto, es muy fácil de operar (plug and play) y tiene un monitor externo opcional para visualizar las imágenes que están siendo analizadas.

PROCESO DE CONTAJE

El ADAM lleva un microscopio de precisión integrado con un sistema óptico para la detección de fluorescencia y un software de análisis de imágenes. Tras la tinción de las muestras con yoduro de propidinio (PI), que se intercala en el ADN de las células, las imágenes de fluorescencia resultantes se toman de manera automática. El equipo toma de 40 a 60 imágenes de cada muestra sobre toda la superficie de la misma. El gran volumen efectivo de medición (9 µl), así como el amplio rango dinámico de cuantificación, garantizan la fiabilidad y la reproducibilidad de las mediciones.

Los siguientes procesos se hacen de manera automática tras la deposición de la muestra en el chip:

• Excitación del láser.

   

• Posicionamiento de la pletina del chip.
• Enfoque automático.
• Detección del chip CCD.
• Procesamiento por software de las imágenes resultantes.

ESPECIFICACIONES TÉCNICAS

1.- Del Equipo

• Láser verde, con excitación a 532 nm.
• Lente con zoom óptico 4x.
• Cámara con chip CCD en blanco y negro.
• Filtro de emisión.
• Peso: 9 Kg.
• Dimensiones (anchura, longitud, altura): 22 cm, 37,5 cm, 25 cm.

2.- Experimentales

• Rango dinámico de cuantificación: 5x104-4x106 células/ml.
• Tiempo de análisis: 15 segundos a 2 minutos por test.
• Volumen de carga por muestra: 20 µl/test.
• Volumen efectivo de medición: 9 µl/test.

3.- Accesorios opcionales

• Teclado.
• Monitor externo.



PARÁMETROS EXPERIMENTALES

1.- Precisión y Reproducibilidad

El gráfico de la derecha muestra el altísimo nivel de correlación en los valores de contaje del ADAM comparados con un Hemocitómetro en células CHO.

2.- Repetibilidad en muestras de diferentes volúmenes

El  gráfico de la izquierda pone de manifiesto la mínima variación existente entre muestras de alta (2,5x105, CV de 0,95%), media (5,99x105, CV de 0,38%) y baja concentración (9,63x105, CV de 0,36%) a lo largo de 10 mediciones.

 

3.- Comparación con la Citometría de Flujo

Se compararon líneas celulares de SK-OV, HeLa y NCI-H23. Los valores del gráfico adjunto son la media aritmética ± desviación estándar de 3 experimentos de células no tratadas y tratadas con 100 y 300 µM de H2O2.




REFERENCIAS

Referencia	Descripción
ADAM-MC	Contador ADAM con Starter Kit
AD2K-200	AccuChip 2x Kit - 200 chips con solución de tinción para 400 tests de contaje total / 200 tests de viabilidad celular
AD4K-200	AccuChip 4x Kit - 200 chips con solución de tinción para 800 tests de contaje total / 400 tests de viabilidad celular
ADR-1000	Solución de tinción para 1.000 Tests